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<;table width="631" border="1" cellpadding="3" cellspacing="0" bgcolor="#666666" style="border-collapse: collapse" bordercolor=#838383>;
<;tr bgcolor="#FFFFFF" align=center>;
<;td width="239" align="center">;
<;p style="line-height: 250%; margin-top: 0; margin-bottom: 0">;项目名称<;/td>;
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<;td width="1007" align="center">;
<;p style="line-height: 250%; margin-top: 0; margin-bottom: 0">;<;b>;荧光定量PCR技术检测慢乙肝患者外周血αβ+T细胞TCR β链CDR3多态性及其应用研究<;/b>;<;/td>;
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<;tr bgcolor="#FFFFFF" align=center>;
<;td width="1246" align="left" colspan="2">;
<;p style="line-height: 250%; margin-top: 0; margin-bottom: 0">;项目介绍:<;/p>;
<;p style="line-height: 250%; margin-top: 0; margin-bottom: 0">; T细胞TCR BV CDR3基因谱型检测,以往的方法大都是通过半定量检测TCR CDR3某些谱系的PCR产物的明显增加而间接推断T细胞的克隆性增殖。<;/p>;
<;p style="line-height: 250%; margin-top: 0; margin-bottom: 0">; 近年来,根据Vβ24个基因家族和Vα的32个家族的cDNA序列分别设计各家族的上游引物,从Cβ1和Cβ2的共同区设计一个Cβ下游引物,每个标本分别进行Vβ24个、Vα32个PCR扩增,通过扩增的产物而判断T细胞克隆增殖,如出现单克隆或寡克隆产物,则进一步分离纯化,进行DNA序列分析,了解其CDR3的核苷酸序列组成情况等,从而可以知道TCR的基因组成。但目前关于CHB患者和无症状HBV携带者外周血TCR基因谱型特征(TCR a 链和TCR b 链CDR3基因谱型)研究方法都较为复杂,并且操作过程中容易污染。我们在国内外首次应用染料法实时荧光定量PCR技术和熔解曲线分析对慢乙肝患者TCR CDR3基因熔解谱型进行检测。从而可以避免聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分析DNA片段大小时的繁琐过程,也体现了染料法(SYBR Green I)荧光定量PCR技术操作简便、重复性高、交叉污染少等优点。此技术为研究与TCR相关的感染性免疫、自身免疫性疾病、移植排斥、肿瘤(血液病)等提供了一个很好的技术平台。熔解曲线分析技术能很方便地在这些T细胞相关疾病中找特异性T细胞克隆,从而有利于疾病的诊断。<;/p>;
<;p style="line-height: 250%; margin-top: 0; margin-bottom: 0">; 我们运用此技术分析了健康献血者外周血外周血αβ+T细胞TCR β链CDR3转录物cDNA相对含量,并创立其PCR产物基因熔解谱型图,用于疾病的诊断,分析了慢乙肝(CHB)患者外周血T淋巴细胞克隆性扩增情况。见附图1~2<;/p>;
<;p style="line-height: 250%; margin-top: 0; margin-bottom: 0" align="center">;<;img border="0" src="../zlyj/xiangmu28.gif">;<;/td>;
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